检验医学期刊发表研究通脉软胶囊质量标准(2)

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　　2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取以五氧化二磷干燥至恒重的人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品、适量，加甲醇制成每1 mL各含0.5 mg的混合溶液，混匀即得(浓度分别为：人参皂苷Rg1 0.596 mg/mL;人参皂苷Re：0.452 mg/mL;人参皂苷Rb1：0.548 mg/mL)。

　　2.2.2 供试品溶液的制备 取本品5粒，剪开，加温水(40～50 ℃)洗涤5次，每次10 mL，加乙醚20 mL洗涤，并入分液漏斗中，弃去乙醚液，再加乙醚20 mL萃取，弃去乙醚液，水溶液用水饱和的正丁醇提取5次(20 mL，20 mL，20 mL，15 mL，15 mL)，合并正丁醇液，用1%氢氧化钠溶液洗涤2次，每次20 mL，弃去碱液,再用正丁醇饱和的水洗涤2次,每次20 mL，收集正丁醇液，置蒸发皿中蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过, 作为供试品溶液。

　　2.2.3 阴性样品溶液的制备 按处方比例分别称取除人参外其他药材适量,按软胶囊制备工艺制得缺人参的阴性样品,照供试品溶液制备项下方法制备阴性样品溶液。

　　2.2.4 色谱条件与系统适用性试验[2] 色谱柱：Hypersil BDS C18(200 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱(大连依利特);流动相：乙腈(A)?水(B)梯度洗脱(B%为80→72→70→80，相应时间周期为0→60→100→120 min);流速：1.0 mL/min;检测波长：203 nm;柱温：30 ℃。理论塔板数按人参皂苷Rg1峰和人参皂苷Rb1峰计算应分别不低于5 000。

　　分别吸取供试品溶液、阴性对照溶液及对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定。记录其HPLC液相色谱图，结果表明人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1色谱峰分离良好,且阴性样品溶液无干扰,见图2。

　　2.2.5 线性关系的考察 分别精密吸取对照品溶液4、8、10、16、20 μL,按上述色谱条件,测定峰面积。以色谱峰峰面积为纵坐标,对照品进样量为横坐标,绘制标准曲线并进行线性回归,得回归方程为：人参皂苷Rg1：A=285789.9m+9904.24，r=0.999 6; 人参皂苷Re： A=239735.86m+19055.7，

　　r=0.999 5;人参皂苷Rb1：A=203251. 68m+11271.2，r=0.999 8。结果表明, 人参皂苷Rg1在2.384～11.92 μg范围内, 人参皂苷Re在1.808～9.04 μg范围内, 人参皂苷Rb1在2.192～10.96 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

　　HPLC chromatograms of reference substances of ginsenosides Rg1, Re, Rb1(A)，Sample(B), and negative control(C)2.2.6 精密度试验 精密吸取对照品溶液10 μL, 注入液相色谱仪，连续测定6次，测得峰面积，计算峰面积积分平均值得：人参皂苷Rg1为1 568 929.4，RSD为1.51%;人参皂苷Re为1 179 013.6，RSD%=1.84%;人参皂苷Rb1为1 229 651.6，RSD为1.68%。结果表明：精密度均良好，符合定量分析要求。

　　2.2.7 稳定性试验 精密吸取供试品溶液10 μL,分别在制备后0、0.5、1、2、4、6、8 h进样,测定色谱峰峰面积, 计算峰面积积分平均值得：人参皂苷Rg1为1 777 943.4，RSD为1.53%;人参皂苷Re为757 386，RSD%=1.86%;人参皂苷Rb1为1 740 510.7，RSD为1.89%。表明样品溶液在8 h内测定结果稳定。

　　2.2.8 重复性试验 分别取同一批供试品6份,按“2.2.2”项下方法制备溶液,依法测定，计算平均含量为：人参皂苷Rg1为0.6452 mg/粒，RSD为1.69%;人参皂苷Re为0.3127 mg/粒，RSD%为1.93%;人参皂苷Rg1+Re为0.9680 mg/粒，RSD为1.98%;人参皂苷Rb1为0.6451 mg/粒，RSD为1.91%。表明本方法重复性良好。

　　2.2.9 回收率试验 精密称取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1对照品适量，加甲醇分别制成每1 mL含人参皂苷Rg10.432 4 mg、人参皂苷Re 0.216 0 mg、人参皂苷Rb1 0.410 0 mg的溶液备用。

　　取本品2粒，剪开，将内容物倾出，置烧杯中，精密加入上述人参皂苷对照品溶液各3 mL，按“2.2.1”项下方法进行样品处理及测定，计算回收率，结果见表1。

　　2.2.10 样品含量测定 分别精密称取3批样品, 按“2.2.1”项下方法制备,依法进样测定，结果见表2。 表1 加样回收率试验测定结果表2 3批样品的含量测定结果

　　3 讨 论

　　3.1 通脉软胶囊按《中国药典》(2000年版一部)规定，仅测定了人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的含量。本文以《中国药典》(2005年版一部)中[人参]项下的高效液相色谱方法为基础,对通脉软胶囊中3个人参皂苷进行了含量测定, 并分别进行了方法学考察，结果表明在本文介绍的供试品制备方法和色谱条件下，同时测定人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1，色谱峰分离完好，所建立的方法可以作为通脉软胶囊的质量控制方法。

　　3.2 色谱柱、柱温的影响

　　比较了大连依利特不同型号的色谱柱对测定结果的影响，发现Hypersil BDS C18柱分离较好，基线基本稳定，人参皂苷Rg1、人参皂苷Re能达到基线分离，而人参皂苷Rb1也能与相邻峰达到分离度的要求。最终选择大连依利特Hypersil BDS C18色谱柱。

　　在所选择的梯度洗脱程序条件下，分别试验了不同柱温对人参皂苷保留值及分离度的影响。在25 ℃条件下，由于流动相的黏度太大，造成柱压升高，基线出现漂移。45 ℃时柱温过高，Rg1、Re分离度变差不能满足定量要求;在30 ℃条件下，人参皂苷的分离度能满足定量要求，故选择30 ℃为柱温。

　　检验医学期刊发表须知：《医学信息》杂志是由国家新闻出版总署批准，中华人民共和国科学技术部主管，中华中医药学会中医容分会和陕西文博信息医学研究所主办的国家级信息医学及临床医学综合学术刊物,面向全国征稿，国际刊号：ISSN1006-1959，国内刊号：CN61-1278/R，邮发代号：52-98，报道医学信息学及临床医学领域领先的科研成果和临床经验,以及对临床有指导作用且与临床密切结合。

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