医学职称论文发表网妇科养荣胶囊质量标准(2)

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　　3 含量测定

　　3.1 测定指标与测定方法的确立

　　本制剂由当归、白芍、黄芪等十六味中药经提取加工制成，我们以液相色谱法测定主要药物白芍中芍药苷的含量。当归为本方君药，其有效成分藁本内酯缺乏对照品，测定阿魏酸时川芎又有干扰，难于建立含量测定方法。因此，选择方中主要药物白芍中的芍药苷作为含量测定方法。本实验参考《中国药典》2005年版一部“含量测定”项下方法采用HPLC法测定白芍中芍药苷的含量。在选定的色谱条件下，供试溶液中芍药苷与相邻组分分离度良好，阴性液无干扰。经方法学考察，方法的重复性、稳定性、精密度、回收率试验均符合有关规定。因此，确立本制剂定量指标为芍药苷，定量方法为液相色谱法。

　　3.2 仪器与所用试剂

　　仪器：高效液相色谱议(UV200 Ⅱ大连依利特科学仪器有限公司);电子天平(AL204梅特勒—托利多上海称重设备公司);试剂：甲醇为色谱纯，其它试剂为分析纯;芍药苷(供含量测定用)，中国药品生物制品检定所。

　　3.3 检测波长的确立

　　精密称取芍药苷对照品适量，加50%甲醇制成每1ml含100μg的溶液，摇匀，照紫外分光光度法《中国药典》2005年版一部附录ⅤA，在200～500nm处扫描，溶液在236nm波长处有最大吸收，确定检测波长为236nm。

　　3.4 方法系统适用性试验考察

　　3.4.1 流动相的筛选与确立 本实验先后采用0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈(85︰15)(Ⅰ)，甲醇-水-冰醋酸(55︰45︰0.5)(Ⅱ)为流动相，在系统(Ⅱ)的条件下，供试溶液中芍药苷与相邻组分分离度良好，阴性液无干扰。故确立甲醇-水-冰醋酸(55︰45︰0.5)为流动相系统。

　　3.4.2 色谱条件 色谱柱：Diamonsil C18柱(250×4.6mm，5um);柱温：室温;流动相：甲醇-水-冰醋酸(55︰45︰0.5);流速：1.0ml/min;检测波长：236nm。

　　3.5 阴性干扰试验

　　3.5.1 阴性液制备 取除去白芍以外的其它药材，按样品制备方法制成阴性液。

　　供试品溶液制备方法：取装量差异项下的本品内容物，研细，过三号筛，取细粉1.5g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流提取1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10ml，蒸干，残渣用50%甲醇约10ml，分次转移至已处理好中性氧化铝柱(中性氧化铝5g，内径约1cm，50%甲醇20ml预洗)上，再用50%甲醇35ml洗脱，收集洗脱液置50ml量瓶中，加50%甲醇定容到刻度，摇匀，精密量取10ml浓缩至干，残渣用50%甲醇1ml溶解，即得。

　　3.5.2 对照品溶液制备 取芍药苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含100μg的溶液，即得。

　　测定法 精密吸取供试品溶液、阴性液、对照品溶液各20μl ，注入液相色谱仪中，绘制液相色谱图，由色谱图提示在对照品色谱相应的位置上，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰，阴性液在此保留时间处无色谱峰。测定结果提示，其它组分对本品中芍药苷含量测定无干扰，方法专属性良好。根据测定结果，确定本实验理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于2000。

　　3.6 线性范围考察

　　取芍药苷对照品10mg，置10ml量瓶中，加50%甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，再分别精密量取0.6、0.8、1.0、1.2、1.4ml，置10ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液各20μl ，分别注入液相色谱仪，测定峰面积，结果见下表。以峰面积(Y)对进样浓度(X，μg/ml)进行线性回归，回归方程为Y=226.168X-135.76，相关系数R2=0.9996。结果表明，芍药苷浓度在60～140μg/ml范围内，峰面积与芍药苷浓度线性关系良好。表 芍药苷线性关系试验结果

　　3.7 最低检测限

　　取线性关系试验项下的3号溶液1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，再取1ml置10ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，再精密量取20μl注入液相色谱仪中，记录色谱图，信噪比约为3︰1，最低检测限为4ng。

　　3.8 定量限

　　取线性关系试验项下的3号溶液1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，再取3ml置10ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。色谱图中，信噪比约为10︰1，计算定量限约为12ng。

　　3.9 稳定性试验考察

　　精密吸取供试品溶液20μl，每隔2小时进样测定一次，共测定4次，结果见下表。平均值为1509.16，RSD为1.8%。表 稳定性试验结果结果表明，供试品溶液在8小时内基本稳定。

　　3.10 精密度试验考察

　　3.10.1 重复性试验考察 取含量测定项下的供试品溶液，精密量取20μl，连续测定6次，结果见下表。峰面积平均值为2075.81，RSD为0.28%，本法重复性良好。表 重复性试验结果测定结果表明，本试验精密度良好，符合有关规定。

　　3.10.2 重现性试验考察 取胶囊内容物适量，按供试品制备方法，分别制备6份供试品溶液，分别测定含量，峰面积平均值为2115.34，RSD为0.69%，表明本法重现性良好，结果见下表。表 重现性试验结果测定结果表明，本试验精密度试验良好，符合有关规定。

　　3.11 回收率试验考察

　　取芍药苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含100μg的溶液，作为对照品溶液。取装量差异项下的本品内容物，研细，过三号筛，取细粉1.5g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流提取1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10ml，蒸干，残渣用50%甲醇约10ml，分次转移至已处理好的中性氧化铝柱(中性氧化铝5g，内径约1cm，50%甲醇20ml预洗)上，再用50%甲醇35ml洗脱，收集洗脱液置50ml量瓶中，加50%甲醇定容至刻度，摇匀，精密量取10ml浓缩至干，残渣用50%甲醇1ml溶解，即得，作为供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，测得供试品中芍药苷的含量(C)为558μg/g。

　　取芍药苷对照品10mg，置10ml量瓶中，加50%

　　甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，从中精密量取1ml，置10ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含100μg的溶液，作为加样用对照品溶液。

　　据上述方法学考察结果，确定含量测定方法为：

　　色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水-冰醋酸(55︰45︰0.5)为流动相，检测波长为236nm;柱温：室温，理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于2000。对照品溶液的制备：取芍药苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含100μg的溶液，作为对照品溶液。供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品内容物，研细，过三号筛，取细粉1.5g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流提取1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10ml，蒸干，残渣用50%甲醇约10ml，分次转移至已处理好中性氧化铝柱(中性氧化铝5g，内径约1cm，50%甲醇20ml预洗)上，再用50%甲醇35ml洗脱，收集洗脱液置50ml量瓶中，加50%甲醇定容至刻度，摇匀，精密量取10ml浓缩至干，残渣用50%甲醇1ml溶解，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入色谱仪，测定即得。本品每粒含白芍以芍药苷(C23H28O11)计，不得少于0.15mg。

　　3.12 含量限度确定试验

　　为制定含量限度，制备供试品三批(20060315、20060316、20060317)。按上述测定方法，测定其芍药苷含量，结果见下表。根据上述测定结果，并根据文献和《中国药典》2005年版一部收载白芍与芍药苷的含量测定项中规定及考虑到本品的收膏率，暂定本品每粒含白芍以芍药苷(C23H28O11)计，不得少于0.15mg。

　　4 讨论

　　在黄芪的鉴别中，为使样品的显示的荧光点更清

　　晰，对检视部分进行了优化，经试验省略了原有的显色部分[喷以10%的硫酸乙醇溶液，105℃加热5分钟后，在紫外光(365nm)下检视]，而是直接在紫外光灯(365nm)下检视，其呈橙黄色荧光，能够准确的鉴别。

　　选择流动相时曾以0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈(85︰15)(Ⅰ)，甲醇-水-冰醋酸(55︰45︰0.5)(Ⅱ)分别考察，结果(Ⅱ)的分离效果好，因此选择后者作为流动相。

　　在芍药苷的含量测定中，供试品制备通过氧化铝柱预处理，能有效地除去大量的干扰杂质，提高色谱分离结果和含量测定的精密度。结果表明，用氧化铝进行前处理，效果较佳。

　　妇科养荣胶囊是根据已有国家标准的妇科养荣丸改变剂型制得，属中药8类品种。方中当归、川芎、白芍对补血活血、调经止痛、月经不调、经闭痛经有较好的作用。根据药品标准[中药成方制剂标准1998年，标准号：WS3-B-2893-98]进行了质量标准的研究工作，拟定了质量标准。本专题对处方中各药味定性、定量方法加以筛选和分析，从而确立稳定可靠的生产质控标准。

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